Μέθοδοι ανίχνευσης μικροοργανισμών

Μέθοδοι ανίχνευσης μικροοργανισμών

Α) καλλιέργεια βιολογικών υγρών

Η καλλιέργεια είναι μια μέθοδος για την ανίχνευση μικροβίων σε διάφορα βιολογικά υγρά. Το προς εξέταση δείγμα «στρώνεται» σε ένα τρυβλίο πετρί – ένα ειδικό πλαστικό ή γυάλινο δοχείο που περιέχει θρεπτικό υλικό. Υπάρχουν πολλά θρεπτικά υλικά, που έχουν πάντα σαν βάση το άγαρ και εμπλουτίζονται με άλλα στοιχεία όπως αμινοξέα, άλατα, κ.α. Οι μικροοργανισμοί αναπτύσσονται σε θρεπτικά υλικά σε 1-3 μέρες και δημιουργούν αποικίες, που επιτρέπουν την ταυτοποίηση και ποσοτικοποίηση του μικροοργανισμού.

Εάν δεν αναπτυχθούν αποικίες ή αν αναπτυχθούν λίγες αποικίες η καλλιέργεια θεωρείται στείρα, με άλλα λόγια το προς εξέταση δείγμα αναφέρεται ότι δεν έχει μικρόβια. Αντίθετα αν αναπτυχθούν 3 ή περισσότεροι διαφορετικοί τύποι μικροβίων τότε θεωρείται πως έγινε επιμόλυνση του δείγματος και η καλλιέργεια επαναλαμβάνεται σε άλλο δείγμα. Πολλοί είναι οι μικροοργανισμοί που ανιχνεύονται με αερόβια καλλιέργεια όπως ο σταφυλόκοκκος, στρεπτόκοκκος, E. Coli κ.α.

Β) έλεγχος με την μέθοδο PCR

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR-Polymerase Chain Reaction) ή η πιο εξελειγμένη μορφή της αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης πραγματικού χρόνου (Real Time PCR) είναι μία μέθοδος βιοχημείας και μοριακής βιολογίας για την απομόνωση και τον πολλαπλασιασμό μέρους του γενετικού υλικού.

Με την PCR μια συγκεκριμένη περιοχή του γενετικού υλικού μπορεί να πολλαπλασιαστεί μέχρι και δισεκατομμύρια φορές. Η PCR τεχνολογία χρησιμοποιείται στη διάγνωση γενετικών ασθενειών και για την ανίχνευση λοιμωδών νόσων. Με την PCR ανιχνεύονται κοινά βακτήρια με μεγαλύτερη ακρίβεια, όπως το μυκόπλασμα και το ουρεόπλασμα. Κυρίως όμως με αυτή την μέθοδο ανιχνεύουμε ιούς, όπως ο ιός των κονδυλωμάτων (HPV), ο κυτταρομεγαλοιός (CMV), ο ερπητοϊός (HSV) κ.α. και εκτός από το δείγμα σπέρματος μπορούν να χρησιμοποιηθούν άλλα βιολογικά υγρά ή κυτταρικά επιχρίσματα.

Γ) Ανίχνευση ενδοκυττάριων παθογόνων (SPI Τest™)

Το SPI Τest™ (Sperm Pathogen Immunophenotyping test) είναι μία νέα διαγνωστική μέθοδος, που εφαρμόζεται για πρώτη φορά παγκοσμίως για την ανίχνευση παθογόνων στο εσωτερικό των σπερματοζωαρίων και άλλων κυτταρικών πληθυσμών. Η ανίχνευση των ενδοκυττάριων παθογόνων, όπως τα χλαμύδια και οι ιοί (HSV I/II, CMV, EBV) επιτυγχάνεται με την χρήση ανοσοφθορισμού και κυτταρομετρίας ροής.

Πιο συγκεκριμένα, για το SPI Τest™ τα κύτταρα αρχικά μονιμοποιούνται, διανοίγονται οπές στη μεμβράνη και μετά ακολουθεί ειδική κατεργασία. Στη συνέχεια επωάζονται με αντισώματα – συγκεκριμένα για τον προς μελέτη μικροοργανισμό – και κατόπιν η ενδοκυττάρια έκφραση των μικροοργανισμών αναλύεται και αξιολογείται με κυτταρομετρία ροής, σε μεγάλο πληθυσμό κυττάρων.

Tο SPI Τest™ χρησιμοποιείται για την ανίχνευση των χλαμυδίων και ιών, όπως ο κυτταρομεγαλοιός (CMV) και ο ερπητοϊός (HSV), σε βιολογικά υγρά ή κυτταρικά επιχρίσματα, όπως σε δείγμα σπέρματος ή σε κύτταρα από τον τράχηλο της γυναίκας.

Το SPI Τest™ προστατεύεται από την νομοθεσία περί πνευματικής ιδιοκτησίας και παρέχεται κατά αποκλειστικότητα στα εργαστήρια της Locus Medicus και το Ανδρολογικό-Ζεγκινιάδου

» Τίτλος ΔΕ: “ΜΕΘΟΔΟΣ ΔΙΕΡΕΥΝΗΣΗΣ ΤΗΣ ΠΑΡΟΥΣΙΑΣ ΕΝΔΟΚΥΤΤΑΡΙΩΝ ΜΟΛΥΣΜΑΤΙΚΩΝ ΠΑΡΑΓΟΝΤΩΝ ΣΕ ΚΥΤΤΑΡΑ ΤΟΥ ΣΠΕΡΜΑΤΟΣ” με Αριθμό Αίτησης 20120100185, κατατεθειμένο στο Οργανισμό Βιομηχανικής Ιδιοκτησίας από τις 29.03.2012 με αριθμό απονομής 1008033. Κατατεθειμένο Ευρωπαϊκό Δίπλωμα Ευρεσιτεχνίας με Αριθμό/Ημερομηνία Κατάθεσης ΕP 13721796.4/24.10.2014 και τίτλο “METHOD OF INTRACELLULAR INFECTIOUS AGENT DETECTION IN SPERM CELLS”. Κατατεθειμένο Διεθνές Δίπλωμα Ευρεσιτεχνίας με αριθμό Αριθμό/Ημερομηνία ΚατάθεσηςPCT/GR2013/000016/29.03.2013.»